Un dosage UV compte tout ce qui absorbe à une seule longueur d’onde. La HPLC sépare d’abord les composés et compte ceux qu’elle nomme. Les deux chiffres répondent à des questions différentes.
Deux offres arrivent pour ce qui semble être le même extrait. L’une indique la teneur en composés actifs par UV, l’autre par HPLC, et le chiffre UV est nettement plus élevé. Aucun des deux n’est forcément faux, et il peut même s’agir de la même matière. Les deux méthodes ne comptent pas les mêmes choses, et chacune exprime son résultat par rapport à une substance nommée.
Voici six points à vérifier avant de comparer deux chiffres de dosage, ou de comparer un certificat avec le résultat de votre propre laboratoire. Ils s’appuient sur les lignes directrices européennes relatives aux médicaments à base de plantes, sur la ligne directrice internationale relative à la validation des méthodes analytiques et sur des études publiées ; l’exemple est tiré de nos propres spécifications. Nos articles précédents portaient sur la spécification, le ratio d’extraction, le certificat d’analyse, le solvant et le support, et les lignes de contaminants ; celui-ci se concentre sur la méthode de dosage.
01 / LA MÉTHODE
La ligne de dosage nomme-t-elle la méthode ?
Un chiffre de dosage appartient à la méthode qui l’a produit. Les lignes directrices européennes relatives aux médicaments à base de plantes l’intègrent à leur définition de la spécification, « une liste d’essais, des références à des procédures analytiques et biologiques et des critères d’acceptation appropriés », et la conformité signifie que la matière, « lorsqu’elle est analysée selon les procédures analytiques énumérées, satisfera aux critères d’acceptation énumérés ».1
Sur une spécification, la méthode tient souvent en un mot court après le chiffre : UV, HPLC ou une autre technique. Une ligne qui en est dépourvue est incomplète. Une revue de 2023 rédigée par des auteurs de l’American Botanical Council et d’organisations partenaires relève que les résultats des dosages spectrophotométriques « sont parfois les seules données sur la composition chimique d’un ingrédient botanique fournies sur un certificat d’analyse », et elle ajoute que l’indication de la méthodologie qui sous-tend un résultat quantitatif « devrait devenir une pratique standard dans l’industrie ».2
À vérifier : que la ligne de dosage nomme la méthode, et que la spécification, le devis et le certificat nomment tous la même.
02 / UV
Que compte un chiffre UV ?
Sur une spécification, UV désigne la spectrophotométrie UV-visible. L’extrait est mis en solution, dans de nombreux dosages un réactif transforme les composés visés en un produit coloré, et l’on mesure la lumière que la solution absorbe à une seule longueur d’onde. Les composés de la solution ne sont pas séparés les uns des autres, si bien que tout ce qui absorbe à cette longueur d’onde s’ajoute au résultat.2
La revue en énonce la conséquence : les concentrations obtenues par spectrophotométrie « sont souvent plus élevées que les résultats d’autres méthodes quantitatives, en raison de l’interférence d’analytes non ciblés qui absorbent à la longueur d’onde étudiée ». Son exemple est l’extrait de chardon-Marie, pour lequel les concentrations de silymarine « sont généralement comprises entre 30 % et 65 % par HPLC-UV et de 65–80 % avec des tests spectrophotométriques ».2
La ligne directrice relative à la validation des méthodes analytiques a un nom pour cette propriété. La spécificité et la sélectivité décrivent « la mesure dans laquelle d’autres substances interfèrent avec la détermination d’un analyte ».3 Les lignes directrices européennes relatives aux médicaments à base de plantes prennent un dosage UV-visible comme exemple de dosage non spécifique.1 Un chiffre UV porte donc sur un groupe de composés, et il doit se lire comme tel.
À vérifier : pour un chiffre UV, quel groupe de composés il est censé compter, ainsi que le réactif et la longueur d’onde qu’emploie la méthode.
03 / HPLC
Que compte un chiffre HPLC ?
La HPLC, chromatographie en phase liquide à haute performance, sépare l’extrait dissous en ses composés avant toute mesure. Les composés apparaissent alors sous forme de pics distincts, et la méthode compte les pics qu’elle nomme. Le détecteur placé en sortie de colonne repose lui aussi, le plus souvent, sur une mesure de lumière : la revue qualifie le détecteur UV/vis de « système de détection le plus largement utilisé ».2 La principale différence entre les deux méthodes est la séparation.
Un chiffre HPLC représente donc les composés que la méthode nomme, un seul ou plusieurs additionnés, et la spécification doit indiquer lesquels. Le rapport de l’Agence européenne des médicaments sur la myrtille européenne en montre le principe. Il cite la définition que donne la Pharmacopée européenne de l’extrait sec raffiné et titré de fruit frais de myrtille européenne : 32,4 % à 39,6 % d’anthocyanes, « exprimés en chlorure de cyanidine-3-O-glucoside ». Le chromatogramme de ce dosage, tel que le rapport le présente, montre vingt pics nommés : quinze anthocyanes et cinq anthocyanidines, leurs formes sans sucre.4
Un composé que la méthode ne nomme pas n’est pas compté, quelle que soit la quantité qu’en contient l’extrait. Et certains groupes ne peuvent être séparés qu’en partie : pour les proanthocyanidines, relève la revue, la séparation des plus grosses molécules « par des moyens chromatographiques est difficile ; c’est pourquoi les fournisseurs utilisent généralement des méthodes spectrophotométriques pour l’analyse quantitative ».2
À vérifier : pour un chiffre HPLC, les composés comptés, et si le chiffre est leur somme ou celui d’un seul composé nommé.
04 / L’ÉTALON
Par rapport à quel étalon, et exprimé en quoi ?
Dans un dosage de la teneur, aucune des deux méthodes ne relève un pourcentage directement sur l’échantillon. Le signal est converti en quantité par référence à une substance nommée, qui est soit mesurée en parallèle comme étalon, soit intégrée au calcul ; dans les lignes directrices européennes, les étalons de référence sont utilisés « pour les essais d’identité et de pureté et pour l’attribution de la teneur ».1 Le résultat est ensuite exprimé par rapport à une substance ou à un groupe nommé. Les lignes directrices relatives à la déclaration des substances végétales et des préparations à base de plantes en montrent la formulation : pour la feuille de séné, des hétérosides hydroxyanthracéniques « calculés en sennoside B » ; pour un extrait de feuille de ginkgo, des flavonoïdes « exprimés en hétérosides flavoniques ».5 Ce qui est nommé n’est pas toujours ce qui a été mesuré : les méthodes de pharmacopée pour le ginkgo dosent généralement les flavonoïdes après une hydrolyse acide, qui détache leurs sucres.2
Changez l’étalon de référence et le chiffre change, alors que la méthode et la matière restent les mêmes. Pour les proanthocyanidines de la canneberge mesurées par une réaction colorée, le dosage DMAC, une étude rapporte qu’un étalon préparé à partir de la canneberge elle-même « a donné des valeurs 2,2 fois plus élevées que celles déterminées par la procyanidine A2 ».6
La forme de la molécule compte aussi. Le rapport sur la myrtille européenne décrit un extrait par deux chiffres, « 36 % d’anthocyanosides, correspondant à 25 % d’anthocyanidines » : le second chiffre compte les mêmes molécules sans leur partie sucrée.4
Notre extrait de canneberge est un exemple d’indication de dosage qui nomme sa méthode et son étalon. Il est spécifié à 30 % ou plus de proanthocyanidines solubles totales (PAC), mesurées par BL-DMAC / UV-Vis et exprimées en équivalents de procyanidine A2. Le dosage utilise la procyanidine A2 comme étalon de référence et mesure l’absorbance à 640 nm ; il ne permet pas d’établir la pureté des PAC de type A isolées. Des résultats obtenus avec des méthodes analytiques ou des étalons de calibration différents ne sont pas automatiquement comparables.
À vérifier : l’étalon de référence, et la forme sous laquelle le résultat est exprimé : un composé nommé, un groupe, ou les molécules avec ou sans leur partie sucrée.
05 / LE CHOIX
Quelle méthode convient au chiffre dont vous avez besoin ?
La HPLC n’est pas la meilleure méthode dans tous les cas. La ligne directrice de validation énonce ce que la validation de toute méthode doit démontrer : « que la procédure analytique est adaptée à l’usage prévu ».3 Lorsque le marqueur est un composé, ou quelques-uns, une méthode séparative peut les compter directement. Lorsqu’il s’agit d’un groupe entier que la chromatographie ne parvient pas à séparer, un dosage de groupe est l’outil habituel.2
Une étude interlaboratoires du dosage DMAC pour la canneberge l’a décrit comme « un dosage spectrophotométrique simple, robuste et relativement spécifique des PAC totales dans des échantillons de canneberge », et a ajouté qu’il « peut ne pas convenir à la comparaison de concentrations entre différents types d’aliments ».7
Un dosage de groupe ne peut pas montrer d’où viennent les composés : parmi les réactions colorées utilisées pour les proanthocyanidines, la revue indique qu’aucune ne « peut distinguer les PAC de sources différentes ».2 Les lignes directrices européennes relatives aux médicaments à base de plantes préfèrent une procédure spécifique chaque fois que c’est possible ; lorsqu’un dosage non spécifique est justifié, elles renvoient à un second essai : « une combinaison du dosage et d’un essai d’identification approprié (p. ex. une empreinte chromatographique) peut être utilisée ».1 La ligne directrice de validation l’énonce de façon générale : un manque de spécificité « devrait être compensé par une ou plusieurs autres procédures analytiques complémentaires, sauf justification appropriée ».3
À vérifier : que la méthode convient au marqueur et, lorsqu’un dosage de groupe est utilisé, quel essai d’identification l’accompagne.
06 / VOTRE LABORATOIRE
Votre propre essai utilisera-t-il la même méthode ?
Un chiffre ne peut être confirmé que par la méthode qui l’a produit. Si votre laboratoire contrôle une livraison par HPLC au regard d’une spécification établie par UV, son résultat n’est pas un résultat au regard de cette spécification, qu’il soit plus bas ou plus élevé. Il n’existe aucun facteur général pour convertir un chiffre en l’autre : l’écart dépend de ce que l’extrait contient d’autre et de la manière dont chaque résultat est exprimé.
Même avec une seule méthode, deux laboratoires ne rendent pas le même nombre. Dans l’étude interlaboratoires, cinq laboratoires ont analysé les onze mêmes échantillons de canneberge par la même méthode DMAC. Mesurée en écart-type relatif, la variation des résultats était en moyenne de 4,1 % au sein d’un même laboratoire et de 16,9 % entre laboratoires (plage de 8 % à 32 %).7
Il faut donc régler trois points avant la commande : la méthode, par son nom et par renvoi à une pharmacopée ou à une procédure écrite ; l’étalon de référence ; et l’écart entre deux laboratoires que les deux parties accepteront. Pour les médicaments dotés d’une monographie de pharmacopée, les lignes directrices européennes indiquent quelle méthode fait foi lorsqu’une autre a été utilisée : « En cas de doute ou de litige, les méthodes d’analyse de la Pharmacopée font foi. »1 Lorsqu’aucune méthode de pharmacopée ne s’applique, c’est à la spécification convenue de jouer ce rôle. Notre article sur le certificat d’analyse présente les points à vérifier à la réception du certificat.
À vérifier : que votre laboratoire et le laboratoire à l’origine du certificat utilisent la même méthode et le même étalon de référence, et quel écart entre leurs résultats les deux parties acceptent.
CE QU’IL FAUT ENVOYER
Indiquez la méthode dès votre prise de contact
Lorsqu’un chiffre de dosage compte pour votre produit, indiquez-nous :
- l’ingrédient, et la partie de la plante si plusieurs sont proposées ;
- l’application prévue et votre marché de destination ;
- le composé ou le groupe dont vous avez besoin, et la teneur cible ;
- la méthode de dosage qu’utilise votre équipe qualité, et l’étalon de référence lorsqu’il fait partie du dosage ;
- si vous contrôlerez vous-même la livraison, et par quelle méthode ;
- les documents techniques dont vous avez besoin, comme une fiche de spécifications ou un certificat d’analyse ;
- votre nom, votre entreprise et vos coordonnées.
Un pourcentage de composés actifs est plus pertinent lorsqu’il est associé à une méthode analytique et à un étalon de référence. Communiquez ces exigences avec votre teneur cible afin que la spécification et le devis décrivent la matière adaptée à votre projet. Les plages de spécifications de notre catalogue sont données à titre de référence, et la faisabilité, la disponibilité et le prix sont confirmés dans votre devis.
L’exemple de produit est tiré des spécifications et des documents techniques de YOHOLIFE®. Cet article ne donne aucune autre valeur de dosage pour nos ingrédients ; la méthode et la spécification d’une qualité retenue sont confirmées lors de votre demande. Les sources 1, 3, 4 et 5 ont été rédigées pour des médicaments et sont citées ici pour leurs définitions et leurs exemples ; la source 2 est une revue de travaux publiés ; les sources 6 et 7 sont des études portant sur un même dosage pour la canneberge, dont seuls les résumés publiés ont été lus. Les sources ont été vérifiées le 12 novembre 2026.
